Hur man utför serieutspädningar

Innehåll

• stadier
• Metod 1 Utför en enkel utspädning
• Metod 2 Beräkna den slutliga utspädningsfaktorn och koncentrationen

Inom kemi består en utspädning av att reducera koncentrationen av en given lösning. En serieutspädning är helt enkelt en upprepad utspädning av en originallösning för att snabbt förstärka utspädningsfaktorn. Denna typ av utspädning utförs ofta under experiment som kräver mycket utspädda lösningar och hög noggrannhet, såsom de som involverar koncentrationskurvor i en loggskala eller de som gör det möjligt att beräkna bakteriedensiteten i vissa media. De utförs ofta inom biokemi, mikrobiologi, farmakologi eller kemi.

stadier

Metod 1 Utför en enkel utspädning

1. 
   

   
   Bestäm rätt utspädningsvätska (eller utspädningsmedel). Valet av utspädningsmedel är mycket viktigt och beror på den lösning du vill späda ut. Utspädningsmedlet är ofta destillerat vatten, men det är inte systematiskt. Med en lösning som innehåller bakterier eller celler används således ett odlingsmedium istället. För serieutspädning används samma spädningsmedel i alla rör.
   • Om du är osäker på vilket utspädningsmedel du ska använda, få hjälp av en behörig person eller leta på Internet efter vad människor måste göra för en liknande upplevelse.

2. 
   

   
   
   
   Förbered flera provrör som innehåller 9 ml utspädningsvätska. Dessa provrör kommer att användas för att göra successiva utspädningar. Principen är enkel, du tar ett prov av startlösningen och överför det till nästa rör, sedan tar ett prov av detta rör för att sätta det i nästa, etc.
   • Innan utspädningarna påbörjas rekommenderas att man i förväg identifierar provrören för att undvika förvirring senare.
   • I varje rör har du en koncentration som är tio lägre än i det föregående. Det första röret kommer att innehålla en utspädd lösning i tionde, andra, hundra, tredje, tusentals osv. Bestäm i förväg antalet utspädningar för att undvika att göra fler rör än nödvändigt och avspädningsmedel i onödan.

3. 
   

   
   
   
   Förbered ett provrör med din moderlösning. Lägg minst 2 ml. Minsta mängd lagerlösning för serieutspädning är en milliliter. Låt 2 ml få en eventuell andra utspädning. Detta rör med moderlösning, du kan markera det som en "SM".
   • Innan du börjar en serieutspädning, blanda startlösningen väl.

4. 
   

   
   Gör den första utspädningen. Pipettera 1 ml av stamlösningen i provröret märkt "SM" och överför denna mängd till det märkta provröret. 1/10 som redan innehåller 9 ml utspädningsvätska. Blanda för att få en homogen lösning. I detta rör finns nu 10 ml lösning: 1 ml stamlösning och 9 ml utspädningsvätska. Denna nya lösning är tio gånger mindre koncentrerad än den tidigare.

5. 
   

   
   Utför den andra utspädningen. I den andra serieutspädningen drar du 1 ml av den märkta rörlösningen 1/10 och du kommer att hälla det i röret 1/100 som redan innehåller 9 ml utspädningsvätska. Röret 1/10 kommer att ha varit väl blandat före provtagning. När överföringen är klar, blanda röret väl 1/100. Lösningen från det markerade röret 1/10 är 10 gånger mer koncentrerad än för det märkta röret 1/100.

6. 
   

   
   Upprepa denna manipulation om det behövs. Denna procedur kan upprepas så många gånger som önskat tills den önskade utspädningen har uppnåtts. För ett experiment som involverar koncentrationskurvor kan du alltså få en serie lösningar med utspädningar till enheten, den tionde (1/10), den hundra (1/100) eller den tusentals (1/1000).

Metod 2 Beräkna den slutliga utspädningsfaktorn och koncentrationen

1. 
   

   
   Beräkna förhållandet den slutliga utspädningen efter serieutspädning. Det totala utspädningsförhållandet uppnås genom att multiplicera utspädningsfaktorn i sig så många gånger som det finns utspädningar. Matematiskt är formeln enligt följande: D_t = D₁ x D₂ x D₃ x ... x D_nmed D_t som representerar den totala utspädningsfaktorn och D_n, förhållandet mellan utspädningen.
   • Så låt oss anta att du utför en 1/10 utspädning av en vätska fyra gånger i rad. Byt ut spädningsfaktorn i formeln med dess värde: D_t = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
   • Den sista utspädningsfaktorn för det fjärde röret i din serieutspädning är 1/10 000. Koncentrationen av lösningen för det sista röret är nu 10 000 gånger lägre än den för den ursprungliga lösningen.

2. 
   

   
   Bestäm koncentrationen av en lösning efter utspädning. För att hitta den slutliga koncentrationen av en lösning efter serieutspädning måste du känna till startkoncentrationen. Formeln är då: C_slutlig = C_initial/ Amed C_slutlig representerande den slutliga koncentrationen av den utspädda lösningen, C_initial, koncentrationen av stamlösningen och D, förhållandet mellan utspädningen bestämd i förväg.
   • Så om du später ut en celllösning med en koncentration av 1 000 000 celler per ml och ditt utspädningsförhållande sattes till 1 000, vad blir den slutliga koncentrationen av ditt utspädda prov?
   • Använd formeln:
     • C_slutlig = C_initial/ A
     • C_slutlig = 1 000 000/1 000
     • C_slutlig = 1000 celler / ml

3. 
   

   
   Var uppmärksam på de enheter som används. Kontrollera alltid att du använder samma enheter när du gör dina beräkningar. Således, om du börjar från en koncentration av celler per ml, kommer ditt slutliga resultat också att vara i celler per ml. Om din startkoncentration är i delar per miljon (ppm) kommer din slutliga koncentration att vara i delar per miljon.